Особенности диагностики коронавирусной инфекции

Просмотров: 1656

Опубликовано 24.10.2014, 23:54 (мск) Предложить Статью в Инфекционные болезни, Статьи

Очень плохая статьяПлохая статьяТак себе статьяХорошая статьяОтличная статья (Читатели ещё не оценили запись, станьте первым!)
Загрузка...

Для диагностики коронавирусной инфекции (КВИ) в настоящее время используют следующие методы:

— выделение вируса в клеточных и/или органных культурах;

— обнаружение достоверного прироста величины титров сывороточных или секреторных антител к КВ;

— выявление в клиническом материале вирусных частиц, вирусных антигенов или нуклеиновых кислот (РНК).

Вирусовыделение является наиболее трудоемким и длительным по времени методом диагностики КВИ, что, главным образом, связано с чрезвычайной прихотливостью КВ к условиям культивирования. Тем не менее, КВ может быть выделен из носовых и глоточных смывов, а также из носоглоточных аспиратов инфицированных индивидуумов. Вирусовыделение достигает определяемых величин ко времени появления начальных симптомов заболевания и продолжается 1−4 дня.

Коронавирус 229Е и родственные ему штаммы выделяются в монослойных культурах фибробластов легких эмбриона человека, примером которых могут служить клеточные культуры WI-38 и MRC-5.

Первичное вирусовыделение штаммов, родственных ОС43, на клеточных культурах невозможно, оно осуществляется только на органных культурах. Используют ткани эмбриона человека — фрагменты эпителия трахеи или полости носа.

Культивирование кишечных КВ представляет еще более сложную проблему и осуществляется на культурах клеток кишечника плода, первичных культурах почки эмбриона человека и на культуре клеток опухоли прямой кишки человека (HRT-18).

Обнаружение достоверного прироста титра сывороточных антител к КВ долгое время являлось практически единственным способом диагностики КВИ как у нас в стране, так и за рубежом. Большинство данных, касающихся особенностей эпидемиологии КВ, также было получено с помощью серологических исследований.

С этой целью использовались реакции нейтрализации (PH), связывания комплемента (РСК), торможения гемагглютинации (РТГА) и непрямой ге- магглютинации (РИГА). Постановка РТГ’А возможна только с участием II антигенной группы КВ, родственных штамму ОС43, у которых в отличие от КВ I группы, присутствует НЕ-белок — гемагглютинин-эстераза, индуцирующий образование вируснейтрализующих и гемагглютинирующих антител, которые можно выявить с помощью РТГА. В НИИ гриппа РАМН был предложен способ обнаружения специфических секреторных антител к респираторным вирусам, в том числе и КВ, во входных воротах инфекции, основанный на модифицированном варианте РИГА, когда антитела определяются в парных смывах из носа и/или зева.

Для диагностики КВИ предложен также метод иммунного блотинга, основанный на обнаружении антител к специфическим белкам вируса, иммобилизованным на нитроцеллюлозной подложке — вестерн-блотинг. Однако более чувствительным методом является иммуноферментный анализ (ИФА), а именно его вариант — ELISA-тест, который позволяет также определять антигены КВ и в образцах фекалий.

Третья группа методов диагностики КВИ включает в себя ЭМИ, ИФЛ метод, а также молекулярно-биологические методы.

Электронно-микроскопическое исследование до настоящего времени остается основным методом в диагностике гастроэнтеритов КВ этиологии, поскольку выделение кишечных КВ в культуре клеток до сих нор представляет значительные трудности. Однако данный метод трудоемок, требует наличия дорогостоящего оборудования и поэтому в широкой клинической практике его использование ограничено.

Иммунофлюоресцентный метод относится к экспресс-методам и позволяет обнаружить антиген КВ в клетках носоглотки инфицированных индивидуумов в течение нескольких часов, но до недавнего времени его применение как за рубежом, так и в нашей стране было невозможно из-за отсутствия соответствующих диагностических препаратов. Следует отметить, что J. Sizun и соавт. (1998) в эксперименте in vitro удалось показать, что результаты диагностики КВИ с использованием флюоресцирующих моноклональных антител к КВ 229Е и ОС43 сопоставимы с результатами ПЦР.

К молекулярно-биологическим методам относятся slot-blot- гибридизация (метод молекулярного зонда) и ПЦР и его модификации — ПЦР в реальном времени (RT-PCR — real-time polymerase chain reaction), гнездная ПЦР (nested PCR).

Разработка метода ПЦР для диагностики КВИ впервые была осуществлена Myint и соавт. в 1994 году. Этому предшествовало секвенирование в 1989 году N-гена КВ 229Е и N-гена КВ ОС43, результаты которого позволили осуществить подбор необходимых праймеров. В 2001 г. A. Vabret и соавт. предложили использовать праймеры для амплификации фрагмента М-гена КВ ОС43 и 229Е.

Данные методы, особенно ПЦР и ее разновидности, несмотря на свою дороговизну, являются высокочувствительными и специфичными, позволяют выявлять незначительные количества КВ, в связи с чем, по мнению авторов, их желательно использовать для исследования респираторных секретов и других материалов от больных с целью диагностики КВИ.


Предложить Статью (1251 Статей)
В этом разделе мы публикуем статьи и материалы по медицинской тематике, присланные нашими читателями. Если у вас есть что-то интересное, чем бы вы хотели поделиться с другими людьми, мы будем рады разместить вашу статью на нашем сайте. Внимание! В случае, если присланный вами материал не соответствует тематике сайта, он не будет опубликован без объяснения причины отказа в публикации. Если в вашей статье имеются ссылки, или статьи будут носить рекламный характер, то Вам сюда.   Защита авторских прав! Присланный вами материал не должен нарушать авторских прав. Если это ваш материал, укажите ваше имя, и оно будет опубликовано в статье. В случае, если вы являетесь правообладателем и заметили, что размещенный на сайте материал нарушает ваши авторские права, напишите нам, этот материал будет немедленно удален с сайта. В письме приложите доказательства того, что вы являетесь автором материала или правообладателем.   По вопросам размещения пишите письма на email — [email protected]