Лабораторная диагностика ВИЧ у детей

Диагноз ВИЧ-инфекция исключается или устанавливается у детей с перинатальной трансмиссией с помощью серологических и вирусологических методов. Серологические направлены на обнаружение антител к вирусу в сыворотке крови методом ИФА и иммуноблота. Вирусологические методы (выделение вируса, ПЦР, вирусная нагрузка) позволяют выявить вирус и/или его компоненты — белки и нуклеиновые кислоты, в частности, gp24-aHTHreH, находящийся в составе вирусных частиц в значительном количестве. Быстрая и ранняя серологическая диагностика ВИЧ-инфекции у детей затруднена, так как антитела класса IgG передаются от матери трансплацентарно и присутствуют у детей до 18 месяцев. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированных детей материнские антитела обычно исчезают к 9-12 мес., это, при отрицательной ПЦР, позволяет говорить об отсутствии инфицирования ребенка. Результаты серологического обследования новорожденных детей учитываются при окончательной постановке диагноза в любом возрасте. Однако в некоторых случаях антитела могут не определяться и у ВИЧ-позитивных детей. Это связано с врожденной гипогаммаглобулинемией, при которой в период, когда уже исчезают материнские антитела (6-18 мес.), не происходит выработки своих антител к антигенам ВИЧ в титрах, достаточных для выявления в ИФА. Таким образом, отрицательный результат серологического тестирования в раннем возрасте оказывается недостаточным для вывода об отсутствии инфекции.

Для установления или полного отрицания ВИЧ-инфекции у новорожденных и детей первого года жизни рекомендуются вирусологические тесты.

Максимально достоверными являются методы полимеразной цепной реакции (ПЦР) (ДНК и РНК-тест) и культурально-вирусологический. Их использование позволяет установить диагноз у 30-50% ВИЧ- инфицированных детей сразу после рождения и почти у 100% -в возрасте 3-6 мес.  Метод ПЦР основан на выявлении нуклеиновых кислот вируса — свободной РНК или провирусной ДНК в лимфоцитах крови, наличие которых свидетельствует о размножении ВИЧ в организме ребенка. Для диагностики ВИЧ- инфекции у детей можно применять оба вида тестов: показано, что они не различаются по чувствительности, однако ДНК-тест значительно проще в исполнении и дешевле. Важным условием получения достоверных результатов является использование для анализа только венозной крови ребенка. Метод ПЦР является высокочувствительным: несколько копий ДНК или РНК в образце плазмы может оказаться достаточно, чтобы результат тестирования был положительным. Поэтому пуповинная кровь непригодна для молекулярного тестирования. Это связано с возможностью контаминации крови ребенка материнской кровью во время родов; малейшая примесь вирусных частиц или лимфоцитов ВИЧ- инфицированной матери может привести к получению ложноположительного результата ЛЦР-анализа, что осложнит установление правильного диагноза ребенку.

По мнению экспертов, диагностическое ПЦР-тестирование следует проводить трижды в следующие сроки: от рождения до 48 ч жизни; в возрасте 1-2 мес; -4-6 мес. Большинство специалистов сходятся во мнении, что при заражении in uteri наблюдается положительный результат вирусологического обследования в первые 48 ч жизни. По мере увеличения возраста ребенка возрастает и выявляемость ДНК ВИЧ при ДНК- тестировании. В случае перинатального заражения в первые 7 дней выявляется лишь 24% инфицированных детей, но уже через неделю их доля составляет 93%. Поэтому большинству инфицированных детей диагноз ВИЧ- инфекции может быть установлен в возрасте 1 мес. при повторном ПЦР- анализе.

Дети, у которых отрицательны результаты вирусологического тестирования при рождении и в возрасте 1 мес., обследуются в возрасте 4-6 месяцев. К возрасту 4-6 мес., практически у всех ВИЧ-инфицированных детей наблюдаются положительные результаты ПЦР-теста.

Другим тестом для оценки вирусологического статуса и мониторинга инфекции является определение вирусной нагрузки — концентрации вируса, выраженной в числе копий РНК ВИЧ (пропорциональном количеству вирусных частиц) на 1 мл плазмы. Для детей характерен высокий уровень вирусной нагрузки, который может сохраняться в организме ребенка в течение длительного времени. Показано, что при внутриутробном заражении в момент рождения концентрация вируса относительно мала (<10 000 копий/мл), однако в течение первых 2 месяцев жизни резко возрастает (100 000 — 1 000 000 копий РНК/ мл и более) и затем снижается очень медленно в течение нескольких лет. Высокий уровень вирусной нагрузки (более 10⁵/мл в возрасте 1-2 мес. обычно соответствует быстрому прогрессированию ВИЧ-инфекции. Для детей характерны более выраженные биологические колебания концентрации вируса в крови, поэтому в возрасте до 2 лет существенными следует считать не менее чем пятикратные различия показателей (для взрослых — 3-кратные). В результате проведенных исследований в США выявлена зависимость уровня РНК ВИЧ и показателей смертности от пола ребенка. Отмечено, что для мальчиков характерен более высокий уровень РНК ВИЧ, но не смотря на это, выживаемость мальчиков существенно выше выживаемости девочек. Показатели вирусной нагрузки имеют значение для оценки состояния, прогноза и решения вопроса о назначении и эффективности антиретровирусной терапии. При хорошем результате лечения уровень нагрузки падает в 100-1000 раз и может оказаться ниже порога чувствительности тест — системы (так называемый «неопределяемый уровень»).

Таким образом, у детей в возрасте от 6 до 18 мес. лишь сочетание двух методов — серологического и вирусологического — позволяет подтвердить или отвергнуть ВИЧ-инфицирование. Сделать вывод о его отсутствии у детей без клинических признаков ВИЧ- инфекции возможно при двух отрицательных результатах серологического и вирусологического тестов. При сочетании положительных вирусологических и серологических результатов инфицирование подтверждается. После 18 мес. единственным подтверждением ВИЧ-инфекции может быть определение антител к ВИЧ в сыворотке ребенка: после этого срока они могут там обнаруживаться только в том случае, если вырабатываются собственной иммунной системой в ответ на контакт с вирусом.